不同基質(zhì)食品中鄰苯二甲酸酯的檢測的系統(tǒng)解決方案

更新時間：2011-06-27

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隨著現(xiàn)代食品工業(yè)的發(fā)展，人們?yōu)榱嗽黾邮称返娘L(fēng)味、改善色澤和延長貨架期等，采用了多種現(xiàn)代食品加工技術(shù)，但是不幸的是，由于種種原因，在某些食品加工過程中使用了危害人們健康的物質(zhì)，比如zui近出現(xiàn)的食品中添加“塑化劑”鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)。

以往，由于人們對鄰苯二甲酸酯類的安全性認(rèn)識不足，多種食品都涉嫌“被添加”。博納艾杰爾科技根據(jù)不同食品基質(zhì)的具體情況，開發(fā)了一系列的檢測方案，以供大家參考。

1.水性樣品

此類樣品包括瓶裝純凈水、礦泉水，茶、果汁和功能飲料等；某些可水溶解的固體樣品。可以先制成水溶液，然后全部作為待處理液，如無脂糖果。推薦前處理柱為Cleanert DEHP （500mg/6mL）。

樣品處理：取10mL樣品，進(jìn)行固相萃取富集處理

固相萃取方法：

活化：5mL甲醇、5mL水

上樣：10mL水性樣品

淋洗：5mL5%甲醇水，真空抽干20min。

洗脫：5mL甲醇

檢測：將洗脫液用氮氣吹干后，以1mL甲醇定容，然后用液相色譜法檢測。

說明：此法多適用于配套液相色譜檢測，當(dāng)樣品中鄰苯二甲酸酯類的含量較低時，需要采用固相萃取富集才能檢測的情況。

一般來說，對于此類樣品，可以采用正己烷液液萃取的辦法，用GC/MS（靈敏度較高）直接檢測。

2.低脂液體樣品

此類樣品包含液態(tài)奶制品、果醬、糖漿等。推薦前處理產(chǎn)品為Cleanert MAS-PAE管。

樣品處理：向玻璃離心管中加入2mL樣品，然后加入4mL乙腈：甲基叔丁基謎（9:1，V/V），將離心管渦旋2min，zui后加入Cleanert MAS-PAE填料，再將離心管渦旋振蕩2min后，以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心5min，取上清液，以鄰苯二甲酸酯檢測針式過濾器過濾后，待檢。

檢測：GC/MS檢測。

3.低脂固體食品

此類樣品包括奶粉、餅干、糕點、果凍、奶糖等，推薦產(chǎn)品為Cleanert MAS-PAE管。

樣品處理：取1g已制成粉末狀的樣品，2mL水，加入到Cleanert MAS-PAE離心管中，然后加入4mL乙腈：甲基叔丁基謎（9:1，V/V），將離心管渦旋2min，zui后加入Cleanert MAS-PAE填料，再將離心管渦旋振蕩2min后，以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心5min，取上清液，以鄰苯二甲酸酯檢測針式過濾器過濾后，待檢。

檢測：GC/MS檢測。

4.高脂樣品

此類樣品包括植物油脂、動物油脂、奶酪、動物組織性食品等，推薦前處理柱為Cleanert PAE。

4.1 動植物油脂樣品的處理

取0.2g樣品，用1mL正己烷溶解，作為待凈化液。

固相萃取方法：

活化：5mL正己烷

上樣：全部待凈化液

淋洗：7mL正己烷

洗脫：3mL乙酸乙酯：正己烷（50:50，v/v），洗脫2次，合并洗脫液。

40℃氮吹至近干（目視只剩少許粘稠油狀物體），加入1mL乙腈反萃取，渦旋振蕩

3min，以4000rpm轉(zhuǎn)速，離心5min，輕輕地將上清液倒入2mL玻璃樣品瓶中，作為待

檢液。

檢測：GC/MS檢測。

4.2其他樣品的處理

取樣品0.5g，以5mL正己烷于密封玻璃瓶中超聲提取，然后以4000rpm轉(zhuǎn)速，離心5min，取上清液作為待凈化液。若樣品中含有水，視情況加入適量無水硫酸鈉后，再進(jìn)行上述操作。

固相萃取方法：

活化：5mL正己烷

上樣：全部待凈化液

淋洗：3mL正己烷

洗脫：3mL乙酸乙酯：正己烷（50:50，v/v），洗脫2次，合并洗脫液。

40℃氮吹至近干（目視只剩少許粘稠油狀物體），加入1mL乙腈反萃取，渦旋振蕩

3min，以4000rpm轉(zhuǎn)速，離心5min，輕輕地將上清液倒入2mL樣品瓶中，作為待檢液。

檢測：GC/MS檢測。

5.復(fù)雜樣品

此類樣品多為油水混合態(tài)，同時添加有多種風(fēng)味物質(zhì)，成分比較復(fù)雜，包括方便面調(diào)味包，醬油、醋、用來調(diào)味的其它醬汁等。根據(jù)樣品中的脂肪含量，對于高脂樣品推薦前處理柱為Cleanert PAE-C柱，對于低脂樣品推薦使用Cleanert MAS-PAEc管。

5.1 以Cleanert PAE-C柱進(jìn)行樣品處理，以方便面調(diào)味包為例：

取0.5g樣品，加入5mL正己烷，渦旋振蕩3min后，再加入500mg無水硫酸鈉，渦旋振蕩3min后，以4000rpm轉(zhuǎn)速，離心5min，取全部上清液作為待凈化液。

固相萃取方法：

活化：5mL正己烷

上樣：全部待凈化液

淋洗：3mL正己烷

洗脫：3mL乙酸乙酯：正己烷：甲苯（50:40:10，v/v），洗脫2次，合并洗脫液。

40℃氮吹至近干（目視只剩少許粘稠油狀物體），加入1mL乙腈反萃取，渦旋振蕩

3min，以4000rpm轉(zhuǎn)速，離心5min，輕輕地將上清液倒入2mL樣品瓶中，作為待檢液。

檢測：GC/MS檢測。

5.2 以Cleanert MAS-PAEc管進(jìn)行樣品前處理，以醬油為例

樣品處理：向Cleanert MAS-PAE離心管中加入2mL樣品，然后加入4mL乙腈：甲苯（9:1，V/V），將離心管渦旋2min，zui后加入Cleanert MAS-PAEc填料，再將離心管渦旋振蕩2min后，以4000rpm的轉(zhuǎn)速離心5min，取上清液，以鄰苯二甲酸酯檢測針式過濾器過濾后，待檢。

檢測：GC/MS檢測。

方法更新： 1. 含油脂食品中鄰苯二甲酸酯類化合物的檢測的樣品前處理

附件一：

液相色譜法檢測16種鄰苯二甲酸酯的含量

色譜柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（訂貨號：VX952505-L）

流動相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50

Time/min	A/%	B/%
0	60	40
2	50	50
10	40	60
12	30	70
20	30	70
31	0	100
40	0	100
40.01	60	40

流速：1.0 mL/min

波長：242 nm

進(jìn)樣量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm）

樣品：16種鄰苯二甲酸酯

濃度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流動相A）

溶劑：正己烷 /40%流動相A

柱溫：30℃

圖1 16種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖（樣品濃度：25ppm）

（鄰苯二甲酸二甲酯DMP，鄰苯二甲酸二乙酯DEP，鄰苯二甲酸二正丁酯DBP，鄰苯二甲酸二辛酯DEHP，鄰苯二甲酸二苯酯，鄰苯二甲酸丁芐酯BBP，鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，鄰苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，鄰苯二甲酸二戊酯DPP，鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，鄰苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，鄰苯二甲酸二環(huán)己酯DCHP，鄰苯二甲酸二異丁酯DIBP，鄰苯二甲酸二己酯DNP，鄰苯二甲酸二壬酯DINP）

表1 16種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)曲線表

峰位置	標(biāo)準(zhǔn)曲線方程	R²
1	Y=24.99X+5.202	0.999
2	Y=17.84X+3.424	0.999
3	Y=24.21X+3.974	0.999
4	Y=14.03X+3.658	0.998
5	Y=24.21X+3.974	0.999
6	Y=17.51X+4.972	0.997
7	Y=17.22X+4.098	0.999
8	Y=18.67X-0.302	0.997
9	Y=12.66X-1.877	0.998
10	Y=14.38X+0.445	0.997
11	Y=15.35X+0.798	0.998
12	Y=11.46X+3.475	0.998
13	Y=13.52X+2.67	0.998
14	Y=9.915X+26.59	0.996
15	Y=10.61X-0.041	0.999
16	Y=9.404X+11.14	0.999

結(jié)論：Agela Venusil XBP C18-L色譜柱能夠較好的分離16種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)，分離度較好，*LC檢測16種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)的含量。由于條件所限，筆者手頭上只有16種鄰苯二甲酸酯物質(zhì)，所做實驗，供大家參考。

附件二

氣質(zhì)聯(lián)用法檢測15種鄰苯二甲酸酯

儀器：Agilent 7890/5975 GC/MS

色譜條件：

色譜柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm

進(jìn)樣口：250℃，不分流進(jìn)樣

程序升溫：50℃（1min）20℃/min 220℃（1min）5℃/min 280℃（4min）

進(jìn)樣量：1μL

流速：1 mL/min

質(zhì)譜條件：

接口溫度：280℃

電離方式：EI

電離能量：70eV

溶劑延遲：7min

監(jiān)測方式：SIM模式，監(jiān)測離子見下表

序號	保留時間/min	中文名稱	英文縮寫	SIM離子
1	8.265	鄰苯二甲酸二甲酯	DMP	163、77
2	9.135	鄰苯二甲酸二乙酯	DEP	149、177
3	10.888	鄰苯二甲酸二異丁酯	DIBP	149、223
4	11.637	鄰苯二甲酸二丁酯	DBP	149、223
5	11.979	鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯	DMEP	59、149、193
6	12.72	鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯	BMPP	149、251
7	13.044	鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯	DEEP	45、72
8	13.41	鄰苯二甲酸二戊酯	DPP	149、237
9	15.552	鄰苯二甲酸二己酯	DHXP	104、149、76
10	15.694	鄰苯二甲酸丁基芐基酯	BBP	149、91
11	17.153	鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯	DBEP	149、223
12	17.81	鄰苯二甲酸二環(huán)己酯	DCHP	149、167
13	18.056	鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯	DEHP	149、167
14	20.444	鄰苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149、279
15	22.98	鄰苯二甲酸二壬酯	DNP	57、149、71

結(jié)論：Agela DA-5ms氣相色譜柱能夠很好的分離15種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)，*15種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)的幾十ppb級含量的定量測定。由于條件所限，筆者手頭上只有15種鄰苯二甲酸酯物質(zhì)，所做實驗，供大家參考。

附件三

牛奶中15種鄰苯二甲酸酯的添加回收率

按正文第2項方法進(jìn)行某種牛奶的添加回收率實驗，得到的數(shù)據(jù)如下：

表1、某種牛奶中添加15種鄰苯二甲酸酯（在樣品中的濃度為50μg/L）的回收率結(jié)果列表

序號	保留時間/min	中文名稱	英文縮寫	回收率
1	8.337	鄰苯二甲酸二甲酯	DMP	87.82%
2	9.214	鄰苯二甲酸二乙酯	DEP	72.31%
3	10.996	鄰苯二甲酸二異丁酯	DIBP	81.97%
4	11.759	鄰苯二甲酸二丁酯	DBP	77.33%
5	12.11	鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯	DMEP	83.87%
6	12.864	鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯	BMPP	83.83%
7	13.201	鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯	DEEP	109.08%
8	13.576	鄰苯二甲酸二戊酯	DPP	86.36%
9	15.757	鄰苯二甲酸二己酯	DHXP	84.67%
10	15.923	鄰苯二甲酸丁基芐基酯	BBP	98.33%
11	17.377	鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯	DBEP	101.30%
12	18.041	鄰苯二甲酸二環(huán)己酯	DCHP	92.47%
13	18.28	鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯	DEHP	132.32%
14	20.718	鄰苯二甲酸二正辛酯	DNOP	89.73%
15	23.303	鄰苯二甲酸二壬酯	DNP	70.10%

某植物油中15種鄰苯二甲酸酯的添加回收率

按正文第4.1項方法進(jìn)行某種牛奶的添加回收率實驗，得到的數(shù)據(jù)如下：

表2、某植物油中添加15種鄰苯二甲酸酯（在樣品中的濃度為500μg/L）的回收率結(jié)果列表

序號	保留時間/min	中文名稱	英文縮寫	回收率
1	8.308	鄰苯二甲酸二甲酯	DMP	149.97%
2	9.185	鄰苯二甲酸二乙酯	DEP	93.49%
3	10.96	鄰苯二甲酸二異丁酯	DIBP	125.70%
4	11.716	鄰苯二甲酸二丁酯	DBP	136.89%
5	12.064	鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯	DMEP	90.84%
6	12.778	鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯	BMPP	82.29%
7	13.144	鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯	DEEP	106.38%
8	13.518	鄰苯二甲酸二戊酯	DPP	88.14%
9	15.686	鄰苯二甲酸二己酯	DHXP	75.32%
10	15.844	鄰苯二甲酸丁基芐基酯	BBP	89.56%
11	17.295	鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯	DBEP	105.05%
12	17.967	鄰苯二甲酸二環(huán)己酯	DCHP	72.94%
13	18.206	鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯	DEHP	124.27%
14	20.625	鄰苯二甲酸二正辛酯	DNOP	78.19%
15	23.297	鄰苯二甲酸二壬酯	DNP	75.27%

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